本文標題："國產(chǎn)觀察生物細胞分析測量光學顯微鏡-上海光學儀器一廠"
發(fā)布者：yiyi ------ 分類: 站內(nèi)動態(tài) ------ 人瀏覽過 -----時間：2013-1-22 1:15:18
軟體基本操作（Single Scan）：
(一)初步掃瞄分析：進入軟體后，可看見如下圖所示之控制區(qū)。
1.先點選”Acquire”，再點選”Beam”，之后會出現(xiàn)一”Parameter Setting”
的視窗，
各項重要欄位說明如下：
A：此區(qū)域是顯示電腦中已有的設(shè)定檔案，其中紅色 L 標記的是系統(tǒng)
預(yù)設(shè)值，通常都是選用預(yù)設(shè)值檔案即可，例如樣本有 FITC 及
TRITC 兩種螢光物質(zhì)，就選擇檔案中的”L FITC_TRITC”即可，
此時系統(tǒng)就會自動將激光開啟至適當?shù)膹姸纫约罢{(diào)整適當?shù)墓?/div>
譜范圍。另外藍色 U 標記的是使用者的設(shè)定值，可由使用者自行
修改存檔（預(yù)設(shè)值則是無法修改存檔）
B：顯示所開啟的激光波長及強度，可視情況做調(diào)整。
C：紅色框框中，藍、綠、黃及紅線各是標示出激光激發(fā)波長，而虛
線則是螢光釋放波長。
D：光譜范圍調(diào)整區(qū)，可依照需求作調(diào)整。
E：將”Active”勾選，即是選用螢光感測用 PMT。
F：穿透光感測用 PMT。
G：由于掃瞄所得之圖片是黑白的，所以必須要套色才能更明顯顯現(xiàn)
出樣本的螢光分佈，可以點選此區(qū)進行套色，一般第一次掃瞄
時，為了得到正確的螢光亮度，會先選擇”Glow(O)”，訊號若太
強的區(qū)域就會顯現(xiàn)藍色，此時調(diào)整 PMT 的大小或是激光的強
度，直到圖像中所有的藍色區(qū)域剛剛好不見為止，此時訊號強度
較為適當。
H：以上所有的設(shè)定值設(shè)定完畢后，若常需使用類似之設(shè)定值，可點
選此鈕進行存檔，存檔后就可以在 A 區(qū)的”User”中看到檔案，下
一次工作時點選該檔案即可進入自己所設(shè)定之狀態(tài)。
2.以上設(shè)定完成后，即可點選控制區(qū)中的”Singal Scan”，進行掃瞄。
得到的結(jié)果會出現(xiàn)在右邊的螢?zāi)唬ㄓ跋裾{(diào)控視窗）上，如下圖。
3.影像調(diào)控視窗預(yù)設(shè)值是只顯示一個掃瞄結(jié)果畫面，如欲觀察兩種以
上的螢光，則需增加其他畫面，方法是點選調(diào)控視窗左側(cè)之選擇鍵
Ch1~3，數(shù)字代表畫面的數(shù)目；另有一個選擇鍵為 Overl.，功能是
將 CH1~3 進行疊合，并將結(jié)果顯示在第四個畫面（右下角）。
3D series / 連續(xù)斷層影像擷取及制作
擷取
1. 基本設(shè)定完成且可掃瞄后,始可使用連續(xù)掃描
2. 連續(xù)掃描時, 調(diào) Z-焦距, 找出上點, 在 Begin 按一下
3. 再找出下點, 然后在 End 按一下
4. 后又于 連續(xù)掃描框內(nèi)按一下
5. 再選切片數(shù)目, 平均數(shù)目, 按 Series 光切掃描.
6. 連續(xù)掃描完成,儲存檔案
可配合
Averaging以消
除雜訊
每一切片的影像
要做平均處理
嗎 ?
決定光切數(shù)目
Z-focus
PMT Gain 1/2/3/4
Pinhole
Zoom
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制作
1. 點選3D,再點選Projection & Animation
2. 開啟連續(xù)掃描檔
3. 設(shè)定各個參數(shù)
4. 點選Prev察看結(jié)果
5. 若結(jié)果滿意即可點選Apply,并將結(jié)果存檔
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Timelapse / 長時間掃描記錄
♦ 點選 Mode,再點選有 t 參數(shù)之選項目
♦ 依據(jù)所選之選項設(shè)定所須之參數(shù),點選 Apply
Line-Mode „xt“ Configuration
Stack-Mode „xyt“ Configuration
Stack-Mode „xyzt“ Configuration
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如何去除 cross talk
1. λ scanning (Lambda Scanning)
# 選擇要測試的螢光物質(zhì)吸光范圍 (e.g. FITC)
# λ beg. 500nm; λ End 700nm
# 在此波長范圍內(nèi), 選擇要掃描幾次 (λ Step)
# 分析
選擇Quantify Pr (Z), 知道高吸收波長落于何處, 可作為選取吸收波長范
圍之依據(jù)
# 注意事項
此功能一次僅能做單一波長校正
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2. Sequential Scan
# 利用 λ scan 訂出佳吸收波長后, 將 condition 儲存
# 勾選 Sequential Scan 選項
# 將儲存的 condition 檔依需要拖曳至下方
# 選擇 between frames
# 點選 series 按鍵開始 scan
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